在哺乳動物細(xì)胞活力與濃度的自動化檢測中，Chemometec 公司的 NucleoCounter® NC-200™細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是常用工具，而耗材的規(guī)范選擇與使用直接決定檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。本文將圍繞該儀器計(jì)數(shù)過程中的核心耗材、耗材作用及完整操作流程展開，兼顧專業(yè)性與可讀性，為科研人員提供清晰指引。

一、核心耗材及作用

在 NucleoCounter® NC-200™的 “活力與細(xì)胞計(jì)數(shù) - 方法 2 檢測"（Viability and Cell Count – Method 2 Assay）中，涉及三類關(guān)鍵耗材，各自承擔(dān)不可替代的角色：

Via1-Cassette™（細(xì)胞計(jì)數(shù)卡）

這是檢測的核心載體耗材，主要作用是裝載細(xì)胞懸液并配合儀器完成檢測。它能與儀器的熒光檢測系統(tǒng)適配，讓儀器通過計(jì)數(shù)卡內(nèi)的樣本，精準(zhǔn)捕捉 Acridine Orange（AO，吖啶橙）和 DAPI（4',6 - 二脒基 - 2 - 苯基吲哚）的熒光信號，進(jìn)而區(qū)分總細(xì)胞與非活細(xì)胞，為后續(xù)計(jì)算提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

待檢測細(xì)胞樣本

即需要分析的哺乳動物細(xì)胞懸液，是檢測的核心對象。需注意，樣本需來自生物反應(yīng)器培養(yǎng)（尤其適用于長期培養(yǎng)且未更換培養(yǎng)基的細(xì)胞），其狀態(tài)（如是否存在 “類細(xì)胞小體"）會直接影響檢測方法的選擇 —— 方法 2 正是為應(yīng)對長期培養(yǎng)細(xì)胞的特殊熒光模式而設(shè)計(jì)。

輔助調(diào)整耗材（生長培養(yǎng)基 / PBS）

這類耗材用于校準(zhǔn)細(xì)胞濃度，確保樣本符合儀器檢測要求。當(dāng)細(xì)胞濃度高于 5×10? cells/ml 時(shí)，需用生長培養(yǎng)基或 PBS 稀釋；當(dāng)濃度低于 5×10? cells/ml 時(shí)，需通過離心收集細(xì)胞沉淀，再用生長培養(yǎng)基或 PBS 重懸濃縮，避免因濃度過高導(dǎo)致計(jì)數(shù)重疊、過低導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。

二、細(xì)胞計(jì)數(shù)完整流程

基于上述耗材，NucleoCounter® NC-200™的細(xì)胞計(jì)數(shù)過程可分為 5 個(gè)關(guān)鍵步驟，操作簡單且自動化程度高：

儀器與程序準(zhǔn)備

啟動儀器的 NucleoView 軟件，在菜單中選擇 “Viability and Cell Count – Method 2 Assay"；若需要追溯樣本，可在界面中輸入對應(yīng)的 Sample ID（樣本編號），便于后續(xù)數(shù)據(jù)管理。

細(xì)胞懸液混勻

將裝有細(xì)胞樣本的容器顛倒或輕彈，確保細(xì)胞均勻分布 —— 這一步能避免細(xì)胞聚集形成 “團(tuán)塊"，防止儀器誤將多個(gè)細(xì)胞計(jì)為一個(gè)，或漏計(jì)聚集在底層的細(xì)胞。

Via1-Cassette™裝載樣本

手持細(xì)胞計(jì)數(shù)卡，將其吸頭端插入混勻后的細(xì)胞懸液中，輕輕按壓計(jì)數(shù)卡的活塞，讓樣本自然吸入計(jì)數(shù)卡的檢測腔室，完成裝載（注意避免吸入氣泡，氣泡會干擾熒光信號檢測）。

啟動儀器檢測

立即將裝載好樣本的計(jì)數(shù)卡放入 NucleoCounter® NC-200™的檢測倉內(nèi)，關(guān)閉倉門后按下 “RUN" 鍵，儀器將自動開始熒光掃描與信號分析。

結(jié)果讀取與校正

檢測約 1 分鐘后，儀器界面會直接顯示兩項(xiàng)核心結(jié)果：細(xì)胞活力（以百分比表示）和總細(xì)胞濃度（單位為 cells/ml）。若檢測前已在軟件中輸入樣本的稀釋倍數(shù)或濃縮體積，儀器會自動計(jì)算并顯示原始細(xì)胞濃度，無需手動換算。

三、耗材使用與計(jì)數(shù)的關(guān)鍵注意事項(xiàng)

為進(jìn)一步確保結(jié)果可靠，使用耗材與操作過程中需關(guān)注兩點(diǎn)核心要求：

若樣本中存在較多細(xì)胞碎片，且僅需計(jì)數(shù) “有核細(xì)胞"，不可繼續(xù)使用方法 2—— 此時(shí)應(yīng)切換至 “Aggregated Cell Assay"（聚集細(xì)胞檢測），避免儀器將無核碎片誤計(jì)為細(xì)胞；

首、次檢測新細(xì)胞系時(shí)，需驗(yàn)證計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性：點(diǎn)擊儀器圖像界面右下角的 “overlay" 按鈕，標(biāo)記儀器識別的計(jì)數(shù)細(xì)胞，目視檢查是否有大量細(xì)胞漏計(jì)或碎片誤計(jì)；若發(fā)現(xiàn)計(jì)數(shù)范圍（門控）不合適，可通過 “Protocol Adaptation Wizard"（方案適配向?qū)В┱{(diào)整門控，覆蓋目標(biāo)細(xì)胞群體（排除碎片和過大雜質(zhì)）后保存新方案，后續(xù)檢測可直接使用。

拓展閱讀
丹麥ChemoMetec 是專注于生物醫(yī)藥行業(yè)細(xì)胞計(jì)數(shù)和分析設(shè)備制造商，主要產(chǎn)品為各種細(xì)胞計(jì)數(shù)儀器和配套耗材。
國內(nèi)主要客戶為生物醫(yī)藥行業(yè)，醫(yī)院、研究所、檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)、醫(yī)藥和生物相關(guān)企業(yè)等。

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